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　反義核酸合成 ( Morpholino Anitisense Oligo Synthesis )
　過去在使用反義(antisense)抑制實驗來探討基因功能時，常因為反義核酸的不穩定、專一性差或效率低
　等問題，而造成實驗的限制。Gene-Tools 現在推出 Morpholino Oligo，將可解決這些困擾研究人員以久
　的缺陷，讓您的實驗更加簡便而精確。

　Morpholino oligo是將6碳環之Morpholine接上鹼基後，以非離子性的phosphorodiamidate連接而成(如圖)。
　相較於過去在反意(antisense)抑制實驗中常用的Phosphorothioate及PNA，Morpholino能有更好之效率及專
　一性；較簡便的使用方式而且較為便宜。
　
　Features of Morpholino Oligos
　穩定性高
　(具核切脢(nucleases)抵抗性)
可穩定存留於細胞內較長的時間可避免產生出具毒性的裂解物質。
　效率高
即使作用濃度僅有nanoMolar，也能有優越的抑制效果。
　不須RNase H
可避免RNase H對與目標RNA相似的非目標RNA產生 裂解作用。
　序列專一性高
其專一性為Phosphorothioate的100倍，即使在高濃度狀況 下使用也
不會降低其專一性。
　對目標RNA結合能力好
可侵入目標RNA的二級結構，達到穩定結合的目的。
　在細胞質及細胞核內皆有活性
可增加Morpholino oligo作用的機會。
　在無細胞系統及細胞內皆適用
Morpholino oligo在有、無細胞之系統下，皆有良好之反意活性。
　不受血清影響
不會與血清中之白蛋白(albumin)結合而降低其活性。
　溶解度好
溶解度可高達100 mg/mL，且在保存過程中不易有沉澱發生。
　Oligo長度最長
最長可提供至25 mer的Morpholino oligo(為目前市售最長的)。即使
長度增加至25 mer，仍能保有高專一性。
　快速簡單的遞送方式
 以Scrape Delivery方式遞送(註)。可避免使用Liposome所造成的細胞
毒性遞送效率高(可高達85~90%)。
　經濟實惠
價格較一般反意核酸較為便宜。

　( 註 )此法僅適用於貼式細胞，Gene-Tools另可提供EPEI遞送方式之步驟及試劑供懸浮式細胞使 用，
　　　詳情請參閱www.gene-tools.com/Using/body_using_products.HTML#SpecialDelivery。

　Morpholino Oligo Targeting Guideline

　•針對post-spliced mRNA上，由5'-cap到起轉譯始點3'端25個base左右的這一段區域內，設計反核酸片段。
　• Morpholino oligo的self-complementarity部分不可超過4個bases。
　•Morpholino oligo的G含量最好不要超過36% (因為會降低oligo的溶解度)
　•Morpholino oligo的長度越長越好(最長25個mer)-Morpholino oligo的價格並非以長度來計算，因此，
　　同濃度情況下，25個mer的長度不會比18個mer的長度來得昂貴。

Comparison between siRNAs and Morpholinos
siRNAs
Versus
Morpholinos
YES
More than 500 publications
YES
NO
Allows you to modify splicing
YES
NO
Effective & specific in embryos
YES
NO
Free of off-target effects
YES
NO
Free of interferon effects
YES
NO
Typical first-try targeting success
YES
NO
Functions in both cytosol & nucleus
YES
NO
Complete stability & long-term efficacy
YES
NO
Well understood mechanism
YES

　Key Morpholino publications

　•Special Issue: Morpholino Gene Knockdowns. Genesis 2001 Jul;30(3).-all 27 papers.
　•Inhibition of zebrafish fgf8 pre-mRNA splicing with Morpholino oligos: a quantifiable method for gene
　　knockdown. Draper BW, Morcos PA, Kimmel CB. Genesis 2001 Jul;30(3):154-156.
　•Evidence for causal role of CD38 expression in granulocytic differentiation of human HL-60 cells. Munshi
　　CB et al. J Bio Chem. 2002 Dec 20;277(51):49453-49458.
　•Morpholino antisense oligomers: the case for an Rnase H independent structural type. Summerton J. Biochim
　　Biophys Acta. 1999 Dec 10;1489(1):141-58.
　• Morpholino oligos: making sense of antisense? Heasman J. Dev Biol. 2002 Mar 15;243(2):209-214.

　想知道更多嗎? 請到 http://www.blossombio.com.tw/Service/MorpholinoAnitisenseOligoSynthesis.html


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