基因表現與分析
單點核酸變異偵測 (Single Nucleotide Polymorphism; SNP Detection)
AcycloPrime-FP SNP Detection Kits
單一核酸多樣性 (SNP, single nucleotide polymorphism)檢測系統
此系統利用基因體放大(ie PCR)包含已知SNPs的核酸片段,來檢測單一核酸多樣性;具簡單的實驗
原理以及高效率的操作步驟,適合於中小型實驗室使用。
特點
:
•實驗流程簡易-均質的(Homogeneous)實驗方式不需額外的離心,清洗以及分離的步驟,減少
了樣本盤與盤之間的轉換,降低了成本與時間。
•實驗方便有彈性-使用一般的分生實驗如PCR及儀器如判讀儀,不需操作複雜的儀器。
•
精準的實驗結果-獨特的AcycloTerminators,提供了高效的精確分析品質。
•
快速的實驗結果-搭配操作簡易的VICTOR3偏極化螢光讀取儀器,即可簡便、快速、精確和大量
自動化的檢測已知SNPs,每一工作日可讀取12,288個樣品結果。
•
節省實驗經費-不需額外標定核酸引子,目前市場上最容易供給的SNPs檢測系統。
•
可重複讀取偏極螢光值數次-避光的條件下,SNP反應後的樣品可保存於-20℃數天
分析原理與簡易流程:
Step1
以聚合酵素連鎖反應從基因體中複製放大含有已知SNP的核酸片段
Step2
加入PCR Clean-up reagent直接去除未反應的核酸引子片段和核甘酸分子。
Step3
加入AcycloPrime Reaction Mix和SNP上游的核酸引子,利用DNA模板直接將螢光標定核甘酸阻
斷子延伸入核酸引子的原理(TDI, Template-directed Dye-terminator Incorporation),延伸一個螢光
標定核甘酸阻斷子於SNP核酸引子後(如圖A),則核酸片段合成反應停於此(如圖B)。由於SNP
核酸引子含有20-30個核甘酸分子,一但和螢光分子結合後,此分子的分子量將遠大於游離的
螢光阻斷子。
Step4
不需額外清洗和分離的步驟,配合VICTOR3判讀儀,以偏極化螢光原理(請參考
FP Principle
),
讀取螢光極值(mP) 經SNPscorer軟體分析,即可偵測SNP類別。
圖A
圖B
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