蛋白質表現與分析

　蛋白質樣本處理 (Protein Sample Preparation)
　Phos-tag 磷酸化蛋白質染劑 (Phos-tag Phosphoprotein Stain)
 

Phos-tag 磷酸化蛋白質染劑（Phos-tag Phosphoprotein Stain）為Zn2+ 螯合物，可與 phosphoserine, phosphothreonine 或 phosphotyrosine 氨基酸結構中的 phosphomonoester 形成專一性結合，藉由偵測此螯合物所帶有的螢光訊號，即可瞭解膠體中或轉漬膜上所含有的磷酸化蛋白質含量。


圖 1. Phos-Tag 磷酸化蛋白質染劑為 Zn2+ 螯合物，可與磷酸化蛋白質上的phosphormonoester 專一性結合


圖 2. Ovalbumin 以12% NuPAGE Gel 進行電泳後，以Phos-tag 300/460 染色，再以兩個不同的激發波長進行訊號偵測. A) ProXPRESS™ Proteomic Imaging System: Excitation filter 460nm, Emission filter 650nm. B) Geliance™ 600 Imaging System: Excitation 302nm

產品特性：

  • 具有優秀的偵測靈敏度，最低偵測量為 1 ~ 5 ng，線性範圍可達1 ng ~ 1 ug
  • 多樣性的螢光訊號波長選擇，適用於多種影像系統
    • Phos-tag 540最大激發光波長為 540 nm，可適用下列影像偵測系統：
      ‧Xenon Lamp with the appropriate filter
      ‧Solid State YAG Laser (532 nm)
      ‧HeNe Laser (543 nm)
    • Phos-tag™ 300/460有兩個激發光波長，分別是300 nm 與 460 nm，可適用下列影像偵測系統：
      ‧UV (300 nm)
      ‧Blue LED Laser (457 nm)
      ‧Argon Laser (488 nm)
  • 可適用於膠體直接染色 (Phos-tag Gel Stain) 或轉漬膜染色 (Phos-tag Blot Stain)
  • 染色後之蛋白質樣品可直接進行 In-Gel Digest，並以質譜儀進行分析鑑定。

實驗步驟：

Phos-tag Gel Stain

  • 將膠體浸泡於50% Methanol / 10% Acetic Acid 三十分鐘
  • 重複步驟 1 至少一小時
  • 以dH2O 洗滌膠體三次，每次十分鐘
  • 將膠體浸泡於Phos-tag Gel Stain 均勻搖晃九十分鐘
  • 以Phos-tag Destain Buffer 洗滌三次，每次三十分鐘,
  • 以dH2O 清洗膠體兩次，每次五分鐘
  • 以適當的影像系統偵測螢光訊號

Phos-tag Blot Stain

  • 將 PVDF 轉漬膜浸泡於10% Methanol / 7% Acetic Acid 十五分鐘
  • 以dH2O 清洗轉漬膜
  • 將 PVDF 轉漬膜浸泡於Phos-Tag Blocking Buffer 一小時
  • 將 PVDF 轉漬膜浸泡於Phos-tag Blot Stain 均勻搖晃一小時
  • 以Phos-tag Destain Buffer 洗滌三次，每次五分鐘
  • 以dH2O 清洗轉漬膜後待其乾燥
  • 以適當的影像系統偵測螢光訊號



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PRD410A001KT

Phos-tag 300/460 Phosphoprotein Blot Stain

For 16 blots

PRD400A001KT

Phos-tag 300/460 Phosphoprotein Gel Stain

For 16 minigels

PRD510A001KT

Phos-tag 540 Phosphoprotein Blot Stain

For 16 blots

PRD500A001KT

Phos-tag 540 Phosphoprotein Gel Stain

For 16 minigels

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